一、實驗原理：

抗原抗體特異性結(jié)合：

抗原是能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)，抗體上的可變區(qū)能識別并結(jié)合抗原上的表位，形成穩(wěn)定的抗原-抗體復(fù)合物，這種結(jié)合具有高度特異性和親和力，是ELISA檢測的基礎(chǔ)。

二、酶標記放大信號：

將檢測抗體或抗原與酶進行標記，常用的酶標記物有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等。酶標記的抗體或抗原與待測樣品中的抗原或抗體特異性結(jié)合，形成酶標記的免疫復(fù)合物。

三、酶催化底物顯色：

實驗步驟

以雙抗體夾心法為例

（一）包被：

將特異性抗體稀釋至適當濃度，加入微孔板中，每孔通常加100μl，用封板膜覆蓋，放入4℃冰箱中孵育過夜，使抗體固定在微孔板上。

（二）封閉：

倒掉包被液，用洗滌緩沖液如PBS-Tween20洗滌微孔板3-5次，每次300μl，最后一次拍干。加入封閉緩沖液，每孔200μl，室溫孵育1-2小時，以封閉非特異性結(jié)合位點，倒掉封閉液，再次用洗滌緩沖液洗滌3-5次，最后一次拍干。

三、加樣：

將待測樣品和標準品稀釋至適當濃度，加入微孔板中，每孔100μl，設(shè)置空白對照孔，加入等體積的樣品稀釋液。

四、孵育：

用封板膜覆蓋酶標板，放入37℃孵育箱中孵育1-2小時，使抗原-抗體反應(yīng)充分進行。

五、洗滌：

倒掉反應(yīng)液，用洗滌緩沖液洗滌微孔板5-7次，每次300μl，最后一次拍干，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景噪音。

六、加酶標抗體：

將酶標記的檢測抗體稀釋至適當濃度，加入微孔板中，每孔100μl，用封板膜覆蓋，在37℃孵育箱中孵育30分鐘-1小時。

七、顯色：

倒掉酶標抗體溶液，用洗滌緩沖液洗滌微孔板5-7次，最后一次拍干，加入底物溶液，每孔100μl，室溫避光孵育15-30分鐘，直至顯色反應(yīng)達到預(yù)期程度。

八、讀數(shù)：

加入終止液，每孔50μl，終止顯色反應(yīng)，使用酶標儀測量各孔的吸光度，通常在450nm波長下讀取。

九、結(jié)果分析

*以上內(nèi)容均來源于網(wǎng)絡(luò)