“邊緣效應(yīng)”是指在利用96孔板進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞在孔板中的位置會(huì)影響細(xì)胞的生長狀態(tài),尤其是處在周邊及四個(gè)角的孔中細(xì)胞通常會(huì)表現(xiàn)出分布不均的現(xiàn)象。
出現(xiàn)“邊緣效應(yīng)”的原因主要有兩方面:
1. 溫度效應(yīng):經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因??装宓木郾揭蚁┍旧頌椴涣紵釋?dǎo)體,在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。
2. 蒸發(fā)效應(yīng):雖然通常細(xì)胞培養(yǎng)箱中都會(huì)放置一盤雙蒸水以維持培養(yǎng)箱中的濕度,但仍難達(dá)到多孔板中的濕度,特別是在培養(yǎng)箱經(jīng)常開關(guān)的情況更是如此。由于位置效應(yīng),邊緣孔的濕度較中間孔更低,水分揮發(fā)的現(xiàn)象就更為嚴(yán)重。這樣就容易造成四周培養(yǎng)基的體積會(huì)明顯少于中間孔,而四個(gè)角落的孔尤為嚴(yán)重。
所以我們?cè)阡?6孔板的時(shí)候,一般外圍這一圈是加PBS,中間的60個(gè)孔才加細(xì)胞。
細(xì)節(jié)決定成敗,細(xì)胞鋪板看似簡單,實(shí)則需要耐心、細(xì)致的操作。當(dāng)然,熟能生巧,相信你多鋪幾塊板,自己也能總結(jié)出自己的經(jīng)驗(yàn)。
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